Influenza Virus Types A and B TechNotes

undefined

Грипп (или ОРВИ) — это респираторное заболевание, вызываемое вирусами гриппа. Ежегодно вирусы гриппа типа A и B вызывают сезонные эпидемии. Более того, грипп типа A является причиной периодически возникающих пандемий, в 2009 году, например, возбудителем послужил штамм H1N1.

Заболевание может протекать как в легкой, так и в тяжелой форме. Согласно данным ВОЗ, ежегодно во время эпидемии фиксируются несколько миллионов случаев заболеваний в тяжелой форме и от 250 000 до 500 000 случаев оказываются летальными. Как правило, тяжело болеют люди из группы повышенного риска - маленькие дети, беременные женщины, люди старше 65 лет, а также больные некоторыми заболеваниями.

Существует целый ряд диагностических тестов на вирус гриппа, основанных на различных технологиях - от методов выделения вируса до иммуно- и молекулярно- диагностических методов. Иммунодиагностические тесты, с использованием моноклональных антител (МоАт), часто выгодно отличаются от других из-за простоты выполнения и низкой стоимости, несмотря на то, что чувствительность таких тестов может значительно отличаться.

Биохимия вирусов гриппа типов А и В

Вирусы гриппа типа A и B представляют собой одноцепочечные РНК содержащие (оц-РНК) вирусы с негативной цепью, которые принадлежат к семейству Orthomyxoviridae. Эти вирусы обычно имеют сферическую форму с диаметром 30-100 нм и покрыты оболочкой. Оц- РНК находится в составе рибонуклеиновых комплексов, которые связаны с РНК-зависимой полимеразой и нуклеопротеином (NP). NP является структурным белком, который определяет принадлежность вируса к разным типам (A, B или C). Два других важных антигена - гемагглютинин (HA) и нейраминидаза (NA) - находятся на поверхности вируса и являются гликопротеинами.

Вирусы гриппа A делятся на подтипы в зависимости от вариаций белков HA и NA. Известно 18 типов гемагглютинина и 11 типов нейраминидазы. В настоящее время штаммы H1N1 и H3N2 циркулируют как сезонные вирусы гриппа А.

Вирусы гриппа В не подразделяются на подтипы. Как правило, свое название они получают в честь географических регионов, где они были обнаружены впервые.

Реагенты для разработки иммуноферментных анализов для выявления вирусов гриппа

Мы предлагаем широкий выбор МоАт с различной специфичностью, которые позволяют выявлять вирус гриппа A и вирус гриппа B в клинических образцах. Кроме того, мы предоставляем несколько штаммов инактивированных вирусов в качестве антигенов.

Моноклональные антитела к вирусу гриппа А

Наша компания предлагает высокочувствительные и специфические МоАт для обнаружения вируса гриппа А. Они подходят для иммуноферментных анализов (ИФА), таких как прямой или непрямой ELISA, «сэндвич» ИФА и вестерн-блоттинг. Антитела специфичны либо к разным белкам гемагглютинина, либо к нуклеопротеину гриппа А и могут быть использованы для обнаружения этих антигенов в различных биологических образцах, таких как назальные аспираты и мазки, клеточные лизаты и т.д. Поскольку МоАт не обладают перекрестной реактивностью к вирусу гриппа В, они могут быть использованы для точного определения типа вируса – А или В.

Антитела специфичные к NP вируса гриппа A (Кат. No 3IN5)

Мы предлагаем пять различных МоАт, высокоспецифичных к нуклеопротеину вируса гриппа А и не обладающих перекрестной реактивностью с нуклеопротеином вируса гриппа B. Антитела были получены против штамма H1N1. Все МоАт выявляют NP с высокой специфичностью и не обладают перекрестной реактивностью с нуклеопротеином вируса гриппа B. МоАт к нуклеопротеину (анти-NP МоАт) имеют одинаковую чувствительность к разным штаммам вируса гриппа А в ELISA. В качестве примера на Рис.1 приведена кривая титрования InA108 МоАт.

undefined

Рис. 1. Кривая титрования МоАт InA108, специфичных к NP вируса гриппа А, выполненная методом непрямого ELISA. Антиген: вирус гриппа А/New Caledonia/20/99 (H1N1); 0,2 мкг/лунка.

Количественный NP «сэндвич» иммуноферментный анализ. Мы протестировали все МоАт в качестве захватывающих и детектирующих антител в «сэндвич» ИФА. Все пары детектируют нуклеопротеин разных штаммов вируса гриппа А. Рекомендованные пары InA108 – InA245 и InA180 – InA245 одинаково детектируют нуклеопротеин в штаммах H1N1 и H3N2. Калибровочная кривая для InA108 – InA245 представлена на Рис. 2.

undefined

Рис. 2. Калибровочная кривая нуклеопротеина вируса гриппа А (Кат. № 3IN5) с использованием пары клонов МоАТ InA108-InA245, полученная при помощи иммунофлуоресцентного анализа.

Антитела распознают различные штаммы вируса гриппа А, но не обнаруживает штаммы вируса гриппа В.

МоАт F8. На основании наших исследований F8 МоАт распознают эпитоп нуклеопротеинов вируса гриппа A с различной антигенной структурой и видовым происхождением. Мы исследовали 25 штаммов вирусов гриппа А человека и птиц, которые были обнаружены в период с 1934 по 1993 год во время различных эпидемий, и во всех случаях наблюдалась специфическая реакция. В дополнении мы исследовали 265 образцов смыва из полости носа у детей, взятых во время вспышек гриппа методом прямого иммунофлуоресцентного анализа. Чувствительность и специфичность выявления вируса гриппа А составили 60% и 98,2% соответственно. Кривая титрования F8 МоАт показана на Рис. 3.

undefined

Рис. 3. Кривая специфической активности МоАт F8, полученная методом ELISA с очищенными вирусными антигенами A H1N1 и H3N2.

Иммунодетекция NP методом вестерн-блоттинг. Для обнаружения NP вестерн-блоттингом после проведения электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецил-сульфата натрия (SDS-PAGE) в восстанавливающих условиях могут быть использованы InA108 и InA245 МоАт. Детекция двух различных штаммов вируса гриппа А с помощью InA108 МоАт показана на Рис. 4.

undefined

Рис. 4. Иммунодетекция вирусов гриппа A с использованием анти-NP InA108 МоАт методом Вестерн-блоттинг после SDS-PAGE в восстанавливающих условиях. Антигены 1 мкг/лунку, МоАт InA108 5 мкг/мл. В качестве вторичных антител использовали анти-мышиные IgG антитела, конъюгированные с HRP. Дорожка 1 – Вирус гриппа A/ New Caledonia/20/99 (H1N1). Дорожка 2 – Вирус гриппа A/Shangdon/9/93 (H3N2).

Антитела, специфичные к H1 вируса гриппа A (Кат. No 3AH1)

Мы предлагаем пять различных МоАт, специфичных к гемагглютинину Н1 вируса гриппа А. Четыре антитела (Кат.No 3AH1) были получены против очищенного вируса гриппа A/New Caledonia/20/99 (H1N1). МоАт к гемагглютинину Н1 способны детектировать штамм H1N1 в методах прямой и непрямой ELISA, но не способны распознавать штамм H3N2.

Количественный H1 «сэндвич» иммуноферментный анализ. Мы протестировали все МоАт в качестве захватывающих и детектирующих антител в «сэндвич» ИФА. Пара антител InA97-InA134 детектирует выделенный штамм H1N1 c высокой специфичностью и чувствительностью. Эти пара антител детектирует вирус и рекомбинантный Н1 гемагглютинин, и может быть использована в ИФА, специфичных к штаммам H1 вируса гриппа А. Калибровочная кривая для InA97- InA134 представлена на Рис. 5.

undefined

Рис. 5. Калибровочная кривая вируса гриппа А, полученная методом иммунофлуоресцентного анализа с использованием анти-гемагглютинина Н1 антител. Захват:

МоАт Захватывающие антитела: InA97 (1 мкг/лунка)

Детектирующие МоАт: InA134, меченные Eu3+ (0,2 мкг/лунка)

Время инкубации: 45 мин

H1N1: вируса гриппа A/New Caledonia/20/99

H3N2: вируса гриппа A/Shangdong/9/93

Вирус гриппа В: смесь штаммов вируса гриппа B/Qingdao/102/91, B/ Tokio/53/99 и B/Victoria/504/00.

Иммунодетекция NP методом вестерн-блоттинг. Анти-H1 антитела (Кат. No3AH1) был протестированы для использования в вестерн-блоттинге. Все МоАт подходят для детекции штамма Н1 методом вестерн-блоттинг после проведения SDS-PAGE в восстанавливающих условиях.

Антитела, специфичные к H3 вирусу гриппа A (Кат. No 3HG3)

Мы предлагаем два МоАт, которые специфичны к гемагглютинину H3. Антитела были получены против очищенного штамма вируса гриппа A/Shangdong/9/93 (H3N2).

МоАт специфичные к H3 детектируют штамм H3N2 методами прямой и непрямой ELISA, но не детектируют штамм H1N1. Кривые титрования МоАт InA246 двумя различными штаммами вируса гриппа А представлены на Рис. 6.

undefined

Рис. 6. Кривые титрования МоАт InA246, специфичных к гемагглютинину Н3.

Иммунодетекция H3 методом вестерн-блоттинг. Оба МоАт обнаруживают штаммы H3 вируса гриппа A методом вестерн-блоттинг после SDS-PAGE в восстанавливающих условиях.

Антитела, специфичные к H5 вируса гриппа A (Кат. No 3H5N)

Вирусы птичьего гриппа, встречающиеся в природе у птиц, относятся к вирусам гриппа А. Штаммы с подтипами гемагглютинина H5 и H7 могут вызывать высокопатогенный птичий грипп с чрезвычайно высокой заразностью и быстрым смертельным исходом для восприимчивых видов птиц. При вспышках птичьего гриппа с участием вируса гриппа с H5 гемагглютинином смертность среди домашней птицы обычно составляет от 90% до 100%. Помимо птиц вирусы, содержащие H5 гемагглютинин, могут вызывать тяжелые инфекции у людей. Мы предлагаем семь различных МоАт, специфичных к H5 гемагглютинину. Антитела были получены с использованием очищенного вируса птичьего гриппа A (H5N1) в качестве иммуногена.

Антитела, специфичные к H7 вируса гриппа типа A (Кат. No 3HI7)

Мы предлагаем три МоАт, специфичных к H7 гемагглютинину. Антитела были получены против очищенного вируса гриппа A/Netherlands/219/03 H7N7. Все МоАт обнаруживают гемагглютинин H7 вируса гриппа A в методах прямого и непрямого ELISA. Мы исследовали перекрестную реактивность МоАт к другим подтипам гемагглютинина H вируса гриппа А: вирус гриппа А H1N1 (штамм A/New Caledonia/20/99), вирус гриппа А H2N2 (штамм A/ Japan/305/57), вирус гриппа А H3N2 (штамм A/ Panama/2007/99), а также к вирусу парагриппа (тип 1 Sendai). Все МоАт продемонстрировали высокую специфичность к H7 гемагглютинину и не связывались с другими протестированными вирусами. Данные по перекрестной реактивности МоАт InA334 представлены на Рис.7 и показывают, что антитела реагируют только на H7.

undefined

Рис. 7. Кривая титрования МоАт InA344, специфичных к гемагглютинину Н7 вируса гриппа А, выполненная методом непрямого ELISA. Вирусные антигены 200 нг/лунка и рекомбинантный H7 (A/Chicken/Netherlands/1/03; a.a.r. 17-527) 10 нг/лунка.

Количественный H7 сэндвич иммуноферментный анализ. Мы протестировали все МоАт в качестве захватывающих и детектирующих антител в «сэндвич» ИФА. На основании способности выявлять H7 гемагглютинин вируса гриппа A были отобраны лучшие пары МоАт с высокой чувствительностью, очищенный штамм вируса гриппа A/Netherlands/219/03 H7N7 и рекомбинантный H7 были использованы в качестве антигенов. Мы рекомендуем использовать пары InA334 – InA331 и InA334 – InA414. Калибровочные кривые для InA334 – InA331 представлены на Рис.8.

undefined

Рис. 8. Калибровочная кривая гемагглютинина Н7 вируса гриппа А, полученная методом «сэндвич» иммунофлуоресцентного анализа.

Захват МоАт: InA334 (1 мкг/лунку)

МоАт для обнаружения: Eu3+, меченный InA331 (0,1 мкг/лунка)

Время инкубации: 45 мин.

A) Вирус гриппа A/Netherlands/219/03 (H7N7)

B) Рекомбинантный H7 (A/Chicken/Netherlands/1/03; a.a.r.17-527)

Антигены вируса гриппа А

Мы предлагаем девять различных штаммов вируса гриппа А (H1 и H3) в качестве антигенов. Вирусы выделены из аллантоисной жидкости 10–12-дневных эмбрионов курицы, инокулированных различными штаммами вируса гриппа А и инактивированных обработкой тимеросалом и бета-пропиолактоном. Чистота всех продуктов составляет >90%. Эти антигены могут быть использованы для обнаружения антител к вирусам гриппа А в ELISA, тестах на ингибирование гемагглютинации и вестерн-блоттинге. Антигены в ELISA не имеют перекрестной реакции как с МоАТ, специфичными к вирусам гриппа A других подтипов HA, так и с МоАТ, специфичными к HA или NP вирусов гриппа B. В тесте на ингибирование гемагглютинации антигены не имеют перекрестной реакции с иммунной сывороткой разных подтипов вируса гриппа A или B (в таблице 1 приведены данные о перекрестной реактивности для двух антигенов).

Таблица 1. Тест на гемагглютинацию антигенов вируса гриппа А.

Только H1N1 и H3N2 антигены выявляются иммунной сывороткой, полученной против соответствующих подтипов, и не выявляются другими иммунными сыворотками.

Антисыворотка кролика к
A/New Caledonia/20/99 (H1N1) A/St.Petersburg/186/00 (H3N2) A/Singapore/1/57 (H2N2) A/swine/1976/31 (Hsw1N1) B/Tokio/53/99
Вирус A/New Caledonia/20/99 (H1N1) 640 <10 <10 <10 <10
A/Panama/2007/99 (H3N2) <10 320 <10 <10 <10

Моноклональные антитела к вирусу гриппа B

Наша компания предлагает несколько МоАт, специфичных к NP вируса гриппа B, HA и матриксному белку 1 (M1). МоАт работают с высокой аффинностью и специфичностью в различных типах иммуноферментных анализов, включая прямой или непрямой ELISA, системы «сэндвич» иммунодетекции, а также в Вестерн-блоттинге.

Антитела, специфичные к NP вирусу гриппа B (Кат. № 3IF18)

Мы предлагаем несколько МоАт, специфичных к NP вируса гриппа B. Все они производятся in vitro и были получены против очищенного вируса гриппа B. Они высоко специфичны к нуклеопротеину вируса гриппа B и не имеют перекрестной реакции с нуклеопротеином вируса гриппа A или другими протестированными вирусными белками. Низкий предел обнаружения наших МоАт позволяет выявить вирус даже в образцах с низким титром вируса гриппа B. Более того, МоАт могут быть использованы в моментальных анализах на вирус гриппа B. В таблице 2 показаны специфические эпитопы. В таблице 3 указаны рекомендаций по выбору пар МоАт.

Таблица 2. Эпитопы МоАт, специфичных к нуклеопротеину вируса гриппа B.

Эпитоп Клон
Фрагмент 1: (1-80 a.a.r.) InB12, InB36
Фрагмент 2: (120-200 a.a.r.) InB27, InB64
Фрагмент 3: (240-320 a.a.r.) InB204, InB210
Фрагмент 4: (480-560a.a.r) InB114, InB213

Таблица 3. Рекомендации по выбору пар антител к нуклеопротеину вируса гриппа В для “сэндвич” иммуноферментного анализа.

Захват Обнаружение
InB12 InB27
InB12 InB64
InB36 InB64

Все МоАт к NP обнаруживают различные штаммы вируса гриппа B в прямом и непрямом ELISA. Кривые титрования МоАт InB114 показаны на Рис. 9.

Количественный «сэндвич» иммуноферментный анализ вируса гриппа В. МоАт были протестированы в «сэндвич» иммуноферментном анализе в качестве захватывающих и детектирующих антител. Рекомендованные пары (Таблица 3) были отобраны на основе их способности обнаруживать несколько штаммов вируса гриппа B и рекомбинантный NP вируса гриппа B с равной специфичностью и высокой чувствительностью. Были протестированы следующие штаммы: Вирус гриппа B/Leningrad/86/93, Вирус гриппа B/Tokyo/53/99 и вирус гриппа B/ Victoria/504/00. Калибровочная кривая для пары InB36 – InB64 показана на Рис. 10.

undefined

Рис. 9. Кривые титрования МоАт InB114, специфичных к NP вируса гриппа B, полученные методом непрямого (A) и прямого (B) ELISA. Вирус гриппа B: Вирус гриппа B/Tokyo/53/99 (A: 0,5 мкг/лунка, B: 0,2 мкг/ лунка).

Вирус гриппа A: смесь штаммов вирусов гриппа A/Shangdong/9/93 и A/ New Caledonia/20/99 (0,5 мкг/лунку).

undefined

Рис.10. Анализ взаимодействия группы антигенов вируса гриппа В (Кат. No RIF17) с различными штаммами вируса гриппа B, выполненный методом прямой ELISA. Антигены абсорбировали на планшете в концентрации 5 мкг/мл, связывание антител тестировали с использованием серии разведений антител от концентрации 1 мкг/мл до 1 нг/мл.

Иммунодетекция вируса гриппа типа В методом вестерн-блоттинг. МоАт выявляют NP вируса гриппа B при проведении Вестерн-блоттинга после SDS- PAGE в восстанавливающих и не восстанавливающих условиях. Вестерн-блоттинг с использованием МоАт InB27 и InB63 показан на Рис. 11.

undefined

Рис.11. Иммунодетекция NP вируса гриппа В методом Вестерн- блоттинг после SDS-PAGE в восстанавливающих условиях.

Антиген: вирус гриппа B/Tokio/53/99, 1 мкг/лунка. Антитела InB27 и InB64, 5 мкг/мл. В качестве вторичных антител использовали анти- мышиные IgG, конъюгированные с HRP.

Антитела, специфичные к M1 вируса гриппа B (Кат. No 3BM17)

Мы предлагаем два МоАт, специфичных к матричному белку M1 вируса гриппа B. МоАт детектируют белок M1 в прямом и непрямом ELISA. Кривая титрования МоАт InB4 показана на Рис.12. Иммунодетекция М1 методом вестерн-блоттинг. Оба МоАт детектируют M1 при проведении метода Вестерн- блоттинг после SDS-PAGE в восстанавливающих условиях.

undefined

Рис.12. Кривая титрования МоАт InB4, специфичных к M1 вируса гриппа В в непрямом ELISA.

Антиген: вирус гриппа В/Tokyo/53/99, 0,5 мкг/лунка.

Информация для заказа

Вирус гриппа А

Моноклональные антитела

Название продукта Кат. № Клон Подкласс Примечания
Вирус гриппа А (Нуклеопротеин) 3IN5 F8 IgG2a ИФА, ИГХ
    InA108 IgG1 ИФА, ВБ
    InA180 IgG3 ИФА
    InA224 IgG1 ИФА
    InA245 IgG2b ИФА, ВБ
Вирус гриппа А (Гемагглютинин Н1) 3AH1 InA97 IgG1 ИФА, ВБ
    InA134 IgG1 ИФА, ВБ
    InA139 IgG1 ИФА, ВБ
Вирус гриппа А (Гемагглютинин Н3) 3HG3 InA227 IgG1 ИФА, ВБ
    InA246 IgG2a ИФА, ВБ
Вирус гриппа А (Гемагглютинин Н5) 3H5N 1C7 IgG2a ИФА, РТГА
    1B4 IgG2a ИФА
Вирус гриппа А (Гемагглютинин Н7) 3HI7 InA331 IgG1 ИФА
    InA334 IgG1 ИФА
    InA414 IgG2b ИФА

Вирус гриппа B

Моноклональные антитела

Название продукта Кат. № Клон Подкласс Примечания
Вирус гриппа Б (Гемагглютинин) 3BH9 InB18 IgG2a ИФА, ВБ, гемагглютинин 2
    InB190 IgG2b ИФА, ВБ, гемагглютинин 2
Вирус гриппа Б (Белок М1 матрикса) 3BM17 InB4 IgG1 ИФА, ВБ
Вирус гриппа Б (Нуклеопротеин) 3IF18 InB12 IgG2b ИФА, ВБ, нуклеопротеин
InB27 IgG1 ИФА, ВБ, нуклеопротеин
InB36 IgG1 ИФА, ВБ, нуклеопротеин
InB64 IgG1 ИФА, ВБ, нуклеопротеин
InB114 IgG1 ИФА, ВБ, нуклеопротеин
InB204 IgG1 ИФА, ВБ, нуклеопротеин
InB210 IgG1 ИФА, ВБ, нуклеопротеин
InB213 IgG1 ИФА, ВБ, нуклеопротеин

See products:



Чтобы быть в курсе новых продуктов и научных открытий

Спасибо Вам за подписку!